ESC单克隆的生长：
将细胞用accutase进行消化，然后使用P1000枪头温和吹打使细胞分离成单细胞。
对单细胞悬液进行计数，并稀释到1e4/ml密度。
将细胞种到6孔板中，每个孔种100ul (1000个细胞)。
细胞培养7-10天，待单细胞长成克隆。
ESC单克隆的挑选：
准备48孔板及培养液。
将倒置显微镜用70%酒精擦拭，并置于超净台中（也可用紫外灯照射消毒显微镜及其他所需物品）。
准备1.5ml EP管，每管加入100ul培养液。
将六孔板置于显微镜下，调整显微镜并找到目的克隆。
使用单克隆挑选装置，用10ul枪头将目标克隆刮下来，然后吸到枪头中。
将枪头中吸取的克隆完全吹到1.5ml EP管中，盖上EP管得盖子。
进行下一个克隆的操作，直到挑选足够的克隆。
将细胞克隆从1.5ml EP管中转移到48孔板中，放到培养箱中进行培养（可将48孔板在200g离心2分钟帮助细胞贴壁）。
大概经过一周左右，根据细胞的生长情况进行传代操作。
ESC细胞的传代：
准备24孔板，每个孔种加入500ul培养液。
吸掉48孔板中旧的培养液，每个孔加入100ul versene，37℃孵育8-10分钟。
用手拍打48孔板，使ESC从培养表面脱落下来。
使用P200枪头，每个孔吸取25ul细胞悬液，转移到24孔板中。（操作的过程中注意对每个孔做好标记，以免混淆）
将24孔板放回培养箱进行培养。
将48孔板中每个孔中剩余的大概75ul细胞悬液转移到PCR管八联管中，做好标记。
将八联管离心收集细胞沉淀。
使用8通道排枪，调到手动模式，设置65ul量程，小心吸取八联管每管中的上清，不要吸到细胞沉淀。
将细胞冻存在-20或-80冰箱中。
ESC细胞的鉴定：
取出冻存的八联管，融化后轻弹管底使细胞分散。
向八联管中每管加入30ul Quick-extract裂解液，涡旋混匀然后再离心。
放入PCR仪，65℃ 10min， 68℃ 10min， 95℃ 10min， 10℃ hold。
每个PCR反应加入1ul裂解液作为模板。